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                              抗體藥物開發「加速器」
                              [ 發布日期:2025-3-26 10:56:39    閱讀次數:75 ]
                                     典型的細胞系開發工作流程始于經質粒轉染后表達免疫球蛋白(IgG)的宿主CHO細胞,將已轉染的單個CHO細胞分離出來進行克隆擴增并篩選出高滴度單克隆以評估其穩定性和親和力,最終擴增這些高抗體產量的CHO細胞系以進行大規??贵w生產。

                                    細胞系開發過程中,快速分離單個CHO細胞是加速整個流程的關鍵步驟。然而,傳統的單細胞分離方法如流式細胞分選(FACS)和有限稀釋存在一些局限性。FACS雖然能夠有效地分離單細胞,但其操作需要專門的培訓和較長的設備設置時間。此外,為了避免樣本間的交叉污染,FACS儀器在使用過程中需要頻繁更換流體線路。更為關鍵的是,FACS在分選過程中會施加高達70 PSI的壓力,這可能會對細胞造成應激,降低其活力,尤其是對于那些難以表達的蛋白質。



                              相比之下,有限稀釋方法雖然對細胞的損傷較小,但其過程勞動密集、耗時且效率較低,難以高效地產生單細胞克隆。這些傳統方法的不足之處凸顯了對更自動化、高通量單細胞分離技術的迫切需求,以提高細胞系開發的效率和成功率。
                               
                               






                              Bio-Techne分選系統提供新方案

                              Bio-Techne單細胞柔性分選系統為細胞系開發提供了自動化、高通量的創新解決方案。與傳統方法一樣,CHO細胞首先會被轉染含有目標蛋白編碼的質粒,以實現大規模生產。轉染后,細胞懸液會被導入到專有的微流控單細胞芯片中,并通過Pala分選儀精確地分選到96孔或384孔板中。培養成單細胞克隆,并通過ELISA分析來測定克隆的抗體滴度。



                              與有限稀釋(約30%)相比,Bio-Techne單細胞柔性分選系統平均鋪板效率超95%,單細胞效率80-90%。



                              與FACS相比,占地面積更小,易于無菌操作,開機校準時間短、關機流程簡單迅速、鞘液消耗更少、耗材成本低、易于終端用戶操作、儀器維護成本更低。




                              Chakrabarti, Lina et al. “Simplifying stable CHO cell line generation with high probability of monoclonality by using microfluidic dispensing as an alternative to fluorescence activated cell sorting.” Biotechnology progress vol. 40,3 (2024): e3441. doi:10.1002/btpr.3441

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