目前,動物疫病檢測主要使用針對單一抗原的免疫學檢測或單一靶標核酸序列的PCR技術。PCR技術在靈敏度上顯著優于傳統抗原檢測。但即使這樣,針對單一病原體核酸靶標的PCR檢測難以滿足大規模樣本篩查對時效性和成本控制的要求,從成本效益的角度考量,并不適合作為常規篩查技術來預防動物性病原感染的爆發。
將核酸檢測的技術路徑從單一檢測升級至多重聯檢方案,并提升單次運行中檢測的樣本通量,是構建高效動物疫病監測防控體系的關鍵突破方向。
羅氏公司新一代熒光定量PCR系統LightCycler PRO,在繼承LightCycler 480核心優勢——即多棱鏡光路設計確保所有孔間檢測一致的基礎上,實現三重升級:
1 – 升級至7通道檢測,無需色差補償,輕松實現單管反應同步檢測7種病原體
2 – 專利的VCM蒸汽均溫模塊,確保整板反應溫控準確且一致(溫度準確性誤差≤±0.1℃,孔間溫度均一性可達0.1℃),在復雜的多重反應體系中提升檢測靈敏度
3 – 40CM觸屏操作,提供中英文操作界面,直觀友好,并能通過平板電腦等移動端進行遠程訪問
此外,LightCycler PRO的模塊化設計支持96/384孔板直接互換,例如在樣本篩查場景下,使用384孔反應模塊(典型溫度程序反應時間≤40分鐘),結合單管7種病原的檢測設計,能在短時間內完成低成本的高通量篩查:在一次PCR實驗運行中,可對300多份樣本實施7重病原體的同時檢測,相較于單靶標檢測,整體檢測時間縮短至原來需時的1/7,檢測成本降低至單靶標的1/4-1/3。通過驗證,我們發現在檢測性能上,基于LightCycler PRO的單管7重在檢測LOD和定量線性方面,均能達到單靶標檢測的同一水平。
下圖為LightCycler PRO熒光定量PCR系統上進行單管7重檢測的典型結果圖,在不同濃度的(病毒)核酸載量下均可清晰區分7種不同病原體的信號曲線,在多重檢測中獲得準確可靠的檢測結果:

7重動物疫病相關病原核酸檢測(滴度109-108)

7重動物疫病相關病原核酸檢測(滴度102-101)

動態檢測范圍11個數量級(1010-100)

LightCycler PRO實時熒光定量PCR儀
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