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Western Blot（WB）被稱為科研人心中的「噩夢」實驗，為什么這么說呢？
首先，WB操作步驟繁雜，實驗流程長。從蛋白提取、制膠、電泳、轉膜、抗體孵育到成像，每個流程都相當耗時。特別是抗體孵育，還需要過夜。
其次，WB實驗結果受太多人為因素的影響。比如，制膠拔梳子太快，膠被弄裂；轉膜「三明治」疊放順序出錯，導致轉膜失敗......
最讓人煩惱的一點，WB實驗的重復性和穩定性不佳。學術新聞里常常能看到SCI 文章由于WB實驗無法重復而撤稿。
望著我的實驗記錄本，滿滿的失敗數據和注意事項。眼看著離心管里來之不易的蛋白樣本就要見底，難道真的沒有更簡單更可靠的WB實驗方法了嗎？

圖片來源：丁香實驗
科研人員為了簡化WB實驗的流程，一直在對其進行優化。近年，興起了一種新的蛋白檢測技術--全自動蛋白質表達定量分析（Automatic Quantitative Protein Analysis）。它將傳統 WB 的制膠、蛋白電泳分離、雜交和成像集成到一個系統中，并實現全自動化。它因為步驟簡單，也被叫做全自動毛細管Digital Western系統（也稱Simple Western）。
Digital Western一經問世，便深受科研人的喜愛，它不光節省樣本，而且大大節省了操作時間，它精確的數據分析能力幫助科研人得到更準確的實驗結果。
頂級雜志Neuron（五年平均 IF = 18.65）2019 年發表的一篇文章中, Digital Western被用于微量中腦組織和原代神經元細胞蛋白質表達分析。作者僅用了 0.2μg總蛋白就得到實驗結果，這只是傳統WB所需蛋白量的幾十分之一。

圖片來源：Neuron
Nature Communications（五年平均IF = 15.81）發表了一篇有關腫瘤細胞信號通路研究的論文，也用了Digital Western 系統來檢測蛋白。在該系統中，所用抗體在正確的波段顯示后才被正式使用到實驗里。通過該系統自動化的數據分析，實驗者對蛋白進行了有效定量，確定了每個樣本中目標蛋白的絕對值，使實驗結果更可信，更精準。

圖片來源：Nature Communications
這些證據也許還不足以證明Digital Western的優勢，我們不免還是抱有懷疑：Digital Western真的有這么厲害嗎？為此，有研究人員專門對比了Digital Western 系統和傳統 WB 兩種蛋白定量分析方法的靈敏度、重復性和適用范圍^[3]。結果表明相比于傳統 WB ：
? Digital Western 無需制膠、無需轉膜，安全環保
? 3 小時左右獲得結果，縮短實驗優化時間
? 全自動化，無需值守，效率更高，可進行多重檢測
? 可以檢測低至 0.5 μg 左右的蛋白量，對于來源不易的樣本，更節省樣品
? 實驗流程標準化，具有可重復性
? 分子量可跨度 2～440 KD
當目標蛋白分子量差異較大時，可以用Digital Western系統同時檢測目標分子和內參。

圖注：采用Digital Western同時檢測兩種蛋白。(A) 同時檢測內參（GAPDH 或 Actin）和目的蛋白Ku70的泳道圖；(B) 同時檢測GAPDH和目的蛋白 Ku70 的峰形圖；(C) 同時檢測Actin和目的蛋白Ku70的峰形圖。
其實，國內外目前已經有許多高分文獻應用 Digital Western 技術檢測蛋白，WB 正在經歷著前所未有的技術革新。Stellar^TM 超靈敏熒光檢測試劑盒，搭載在全自動多功能超靈敏熒光Western蛋白質分析平臺Jess上（Digital Western），能為科研人提供自動化高靈敏熒光免疫蛋白檢測技術解決方案。優勢如下：

圖注：ProteinSimple超靈敏熒光檢測試劑盒 Stellar^TM
? 多通道，可以在同一個泳道對不同蛋白多重檢測；

圖注：Stellar NIR和IR熒光多重檢測的AKT總/磷蛋白。Stellar^TM NIR / IR通道能夠在同一泳道中多重檢測總AKT和磷酸化AKT，并具有出色的重現性（24個泳道: pAKT < 10% CVs和Total AKT < 5% CVs）。
? 微量樣品，3小時獲得結果，定量準，重復性高；

圖注：Stellar^TM 熒光檢測的靈敏度通過DNA與檢測抗體相連的多個信號放大步驟實現。
? 簡單高效對細胞信號通路研究中磷酸化蛋白進行檢測
? 全程追蹤記錄，原始數據不可纂改，解決傳統 WB 圖片誤用造假問題
? 總蛋白質含量歸一化分析，可以比較蛋白質上樣量
? 與對照樣品歸一化處理，比使用內參蛋白更可靠，增加數據說服力
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內容策劃：王丹琦
內容審核：朱超敏
題圖來源：圖蟲創意

參考文獻：
[1]. Back S., Necarsulme J., Whitaker L.R., et al., Neuron-Specifific Genome Modifification in the Adult Rat Brain Using CRISPR-Cas9 Transgenic Rats. Neuron , 2019, 102: 105–119.
[2]. Ilyas Chachoua, Ilias Tzelepis, Hao Dai, et al., Canonical WNT signaling-dependent gating of MYC requires a noncanonical CTCF function at a distal binding site. NATURE COMMUNICATIONS, 2022,13: 204.
[3]. 雷虹, 胡峰瑞, 陳妍珂, 茍興春. 蛋白免疫印跡和全自動蛋白質定量分析的比較研究[J]. 生物醫學, 2021, 11(2): 113-119.

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