材料

• Spark Cyto 600 全自動實時活細胞成像檢測系統，包含濕度盒 （Tecan）

• D300e 微量加樣器 （Tecan）

• Real Time-Glo™ MT 細胞活力試劑盒（Promega）

• HeLa 細胞 （ATCC）

• Jurkat 細胞 （RIKEN BRC）

• Greiner 384 孔白色透明底聚苯乙烯細胞培養微孔板（cat #：781098）

• Greiner 384孔白色聚苯乙烯細胞培養微孔板（cat #：781075）

• 臺盼藍，二甲基亞砜

方法

• 設定Spark Cyto 細胞培養條件: 37 °C ，5 % CO2

• 將MT細胞活力底物、NanoLuc®酶和細胞培養基孵育至37℃

• 用臺盼藍染色HeLa或Jurkat細胞并計算活細胞數

• 將細胞懸浮液稀釋至25或125個活細胞/­l，并以40­l/孔（1000或5000個細胞/孔）的濃度將其接種在384孔板中，在37℃的CO2培養箱中過夜

說明

• 通過單獨的實驗提前確定合適的細胞接種密度

• 細胞接種可以選擇單通道或多通道手持加樣器或自動化解決方案，如Tecan Fluent® 自動化工作站

• 空孔使用無菌水填充，減少樣品蒸發

• 準備5X RealTime-Glo試劑用于在培養基中稀釋MT細胞活力底物和NanoLuc 酶

• 每個孔中加入10­l 5X Real Time-Glo試劑，并輕輕混合。

• 在37 °C和5% CO2的細胞培養箱中孵育30-60分鐘。注：無菌水和小型濕度盒提前預熱至37°C

• 使用D300e T8+分配盒移液溶解在DMSO中的化合物，劑量范圍從0到1­M，并使每個孔中DMSO的總體積歸一化。注：快速移液以減小溫度波動

• 在Spark Cyto中每1小時監測1次發光信號，持續24-48小時（詳見實驗方法）。注：若在檢測過程中需要向濕度盒中添加無菌水，可提前優化實驗方法。

• 導出數據并使用Python 3進行數據分析。注：數據分析可以選擇Excel等其他軟件

結果和討論

        通過明場成像24小時觀察細胞匯合度，并使用預置的程序進行評估?；衔顰給藥24小時后，細胞匯合度受到抑制，并呈現劑量依賴性，表明化合物A抑制了細胞增殖（圖1）。

      (A) 使用Spark Cyto獲得的HeLa 細胞明場圖像 (B) 細胞匯合度隨時間的變化 (C) 化合物A給藥24小時后的歸一化值（N = 4，mean ± 95 % CI）

        使用基于發光的方法檢測細胞活力。在0小時的發光信號定義為陰性對照（圖2A），24小時內呈現明顯的劑量效應（圖2B）。與圖1的結果抑制，化合物A降低了細胞活力，并呈現劑量依賴性。Spark Cyto的細胞匯合度和細胞活力數據可用于評估藥物療效。

     同時檢測了懸浮細胞Jurkat的細胞活力，實驗結果顯示化合物B抑制了細胞增殖或誘導細胞死亡，并呈現劑量依賴性（圖3）。

結論

        D300e和Spark Cyto的成功聯用，為藥物對HeLa和Jurkat細胞的活力和生長的影響提供了綜合數據，證明了該裝置適用于貼壁或懸浮細胞的藥物分析。兩種不同檢測方法的同時使用，突顯出Spark Cyto在多重實驗分析中的實力。

（文章來源：hmez.huimeihealth.com.cn/hm/scrm/scrmmobile/eda/1654774561053659136）