簡介

        AlphaScreen 是一種基于微珠的篩選技術，旨在快速、可靠且經濟高效地檢測生物分子相互作用。Alpha (ampli?edluminescent proximity homogeneous assay “放大化學發光親和均相檢測”的首字母縮寫）技術使用了由不同的化學混合物組成的供體微珠和受體微珠，它們可以連接到各種類型的生物相關分子。在680 nm激光的照射下，供體微珠中的光敏劑苯二甲藍(Phthalocyanine) 將周圍環境中的氧分子轉化為轉化成一種高能活躍的氧狀態- 單線態氧( S i n g l e tOxygen)。單線態氧小分子的半衰期為4 s，在此期間它們可以在溶液中擴散高達長達 200 nm的距離。如果在該范圍內存在受體微珠，單線態氧就會觸發受體微珠的二甲基噻吩衍生物，繼而通過激發一系列的化學反應，最終在520-620 nm產生光信號，從而達到檢測目的。

        AlphaScreen Omnibeads 微珠是一種易于使用、經濟高效的工具，產生 AlphaScreen 信號所需的全部化學物質都在這些微珠中，專為 AlphaScreen 兼容檢測儀器的定期質控、酶標儀標準化和校準而設計。

        Tecan Spark酶標儀配備了增強型檢測模塊，包括用于優化 AlphaScreen 供體微珠激發的高功率激光光源，以及優化濾光片組合，非常適用于AlphaScreen，AlphaLISA®，AlphaPlex™ 和潛在的新 Alpha 技術應用的發射信號超高靈敏檢測。此外，Spark 酶標儀還擁有 Tecan 久負盛譽的實時溫度校正功能，可改進微孔板上樣品溫度波動帶來的影響。Spark 酶標儀還為 Alpha 技術集成了易于使用、直觀的軟件解決方案和預先優化的實驗流程，為AlphaScreen,AlphaLISA 和 AlphaPlex 檢測保駕護航。

        本技術說明主要討論了AlphaScreen 技術在 Spark 多功能酶標儀上的成功應用，并介紹了儀器的檢測靈敏度、均一性和讀取時間等方面的性能。

材料和方法

• Spark 多功能酶標儀(Tecan, 奧地利)

• AlphaScreen Omnibeads (PerkinElmer, 美國)

• 磷酸鹽緩沖鹽水 (PBS)

• 384孔，白色低容量微孔板（Greiner Bio-One，德國）

        利用 Omnibeads 作為代表性化學物質產生的最小可檢測信號，對 AlphaScreen 的靈敏度進行評估。根據制造商的說明 (1) 使用 Omnibeads，在避光條件下（<50 lux）移液以防止組件發生光漂白。簡而言之，在 2.44 至 20,000 ng/ml 的濃度范圍內制備了 Omnibeads 稀釋系列 (1:2)。

        將各濃度稀釋液的5份重復樣品分別添加到 384 孔低容量微孔板（20 l/孔）中；同時，將不含 Omnibeads 的 PBS緩沖液作為空白對照。此外，將 10,000 ng/ml Omnibeads 稀釋液的復制品添加到另外單獨的微孔板上， 以評估AlphaScreen 檢測的均一性。AlphaScreen 檢測的儀器參數設置參見表1。

        將平均空白校正值與 Omnibeads 的最終濃度作圖，并添加一條線性趨勢線，并將截距設置為零。檢測限由趨勢線方程 y = kx 確定，使用空白的標準偏差作為 y 值。

        為了確定檢測的均一性，CV 使用公式 1 計算：

結果

        靈敏度和線性度

        Spark 酶標儀能夠檢測低至 1.6 ng/ml 的 Omnibeads 濃度，線性度為 0.9999（R2 值），信號/空白比為 1,154:1（圖2）。

        均一性

        將 10,000 ng/ml Omnibeads 稀釋液的 50 多份重復的樣品移液至 384 孔板中。檢測結果表明信號均一性非常好，CV 值僅為 2.2% 。這表明 Spark 酶標儀能夠檢測 AlphaScreen信號，且不會產生顯著的結果波動（圖 3）。

讀取時間

        AlphaScreen 在不同微孔板格式中的總讀取時間包括激發和積分時間，以及應用溫度校正功能所需的時間。通常，我們推薦使用 Alpha檢測的標準設置，即激發和積分時間分別為 100 和 300 毫秒，可以在 4 分 28 秒內完成整塊 384孔板的讀取。當溫度校正功能激活后，基于 IR 的溫度評估與信號檢測會同時進行，因此檢測時間會稍微延長。這導致絕大多數特定微孔板格式的讀取時間延長約20%。然而，我們可以通過使用更短的激發和發射周期（激發和積分時間都低至 10 毫秒）來顯著縮短總讀取時間，同時為個性化應用提供優化方案。

        表 2 顯示了 96 孔板和 384 孔板的 AlphaScreen 讀取時間概覽。

結論

        Spark 酶標儀的增強型檢測模塊在 96 孔和 384 孔板格式的靈敏度和均一性等基本質量參數方面，均為 AlphaScreen檢測提供了出色的性能保證。溫度校正功能可用于進一步提高分析性能，而無需在檢測前對樣品進行耗時的溫度平衡過程。與 Spark 酶標儀經典的檢測模式結合，Alpha 技術模塊為科學研究、分析方法的開發以及高通量篩選等提供了卓越的性能。

參考文獻

1) Using the AlphaScreen Omnibeads.www.perkinelmer.com/CMSResources/Images/44-73451MAN_AlphaScreenOmniBeads.pdf


(文章來源：hmez.huimeihealth.com.cn/hm/scrm/scrmmobile/eda/1654372357725540352)